胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）主要以健康母牛怀孕4至8月龄的胎牛血液作为原料，经无菌采集与多道微孔过滤处理而成。目前，胎牛血清已广泛应用于各类真核细胞的培养中，提供关键的营养成分和生长因子，成为各大实验室的“常驻嘉宾”。为了最大化胎牛血清的效果并确保细胞的状态，以下是一些实验小技巧，供大家参考。

一、初次解冻胎牛血清的方法

常规情况下，胎牛血清应储存在-20℃，长期保存可降至-80℃。解冻时，建议将其从-20℃或-80℃转移至4℃逐步解冻，避免直接置于常温中，以免产生沉淀，影响品质。在解冻过程中，轻轻晃动管子，使成分均匀混合，减少沉淀的产生。解冻后可以分装于15mL或50mL无菌离心管内，频繁使用的可以选择在4℃存放，尽量在一个月内用完。解冻后的胎牛血清不宜在37℃或室温下存放，以避免细胞生长因子的失活。

二、血清的用量

原则上，添加的胎牛血清量不宜过多，通常为5%、10%或20%。多数细胞正常培养时使用10%的浓度，而部分原代细胞则可能需要20%。具体血清浓度需根据细胞特性和实验目的进行探索。

三、何时需要热灭活胎牛血清？

热灭活是指将已解冻的胎牛血清在56℃下处理30分钟，此步骤可以激活补体并去除其活性。尽管某些特定实验需要热灭活，但对大多数细胞培养通常不是必需的，过热处理有可能影响血清质量，导致细胞生长速度下降和沉淀增多。

四、正确更换血清的步骤

在细胞培养中，常会遇到需要更换血清的情况。直接将新血清替换掉旧血清可能导致细胞不适应，出现生长缓慢或死亡。一般建议采用梯度更换的方法，使细胞逐步适应新环境。初次更换时，建议使用1:3比例，随后可逐渐调整为1:1、3:1，最终完成替换。对于敏感细胞，替换比例需进一步细化。

五、解冻后出现悬浮物的处理

如果解冻后发现血清中有少量乳白色絮状物，这多为脂蛋白的变性和纤维蛋白的残留。此类沉淀不会影响血清质量，可以选择离心后取上清使用，对细胞影响不大。

六、使用前胎牛血清的过滤需求

通常，商家提供的胎牛血清为无菌状态，无需再进行过滤。如果发现悬浮物，可以将其加入培养液中一起过滤，但不要直接过滤血清。

七、镜下观察到的“小黑点”是否为污染

在培养过程中如果发现黑点，首先需判断培养基是否混浊，黑点是否活跃运动。如果没有混浊且细胞状态正常，黑点可能是细胞残骸、血清杂蛋白或者培养基水质问题。可通过离心或过滤去除这些影响因素。若原代细胞中出现黑点，可能源自原代组织的杂质，多次传代后可解决。

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