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NEWS尊龙凯时ELISA试验背景高状况解读
来源:曹园婕 日期:2025-02-13尊龙凯时的ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种广泛运用于生物医疗领域的高敏感度、高特异性的实验技术,旨在检测和定量分析样品中特定抗原或抗体的存在。通常情况下,阴性孔的吸光度值不会超过0.1。然而,若遇到ELISA空白背景较高的情况,常见原因及其处理方法如下:
解决方案:
①充分洗涤:不足的洗涤时间可能导致抗体残留,使阴性对照显色。可尝试延长洗涤时间及提高洗涤频率,推荐在洗液中添加表面活性剂Tween-20,并确保每一步都洗涤彻底。
②避免交叉污染:在弃去洗液及孵育抗体时,应尽量避免交叉污染,建议移液枪头一次性使用,拍板滤纸应勿反复使用。
解决方案:检查试剂盒的有效期,若试剂已过期,须更换为新的试剂盒,并按照说明书正确保存。同时,建议每次未用完的显色液不要回收,或仅回收用清洗过的容器盛装的显色液。
解决方案:按照说明书推荐的稀释倍数进行抗体稀释,确保检测抗体/酶结合物工作液的浓度适宜。
解决方案:使用的试剂盒每个组分均需在实验前平衡至室温。
解决方案:务必使用与试剂盒配套的完整试剂,避免不同品牌或批次的试剂混用,以防不匹配而引起的误差。
解决方案:使用新鲜蒸馏水,确保水源的纯净性。
解决方案:孵育时间过长或温度过高可能导致非特异性结合增加。需检查培养箱的温度是否稳定在37℃,并严格按照说明书的反应时间进行孵育。
解决方案:在加入终止液后,使用75%乙醇浸润的脱脂棉球清洁酶标板底部,确保无污渍后再进行检测。
解决方案:洗液应现配现用,避免长期存放造成析出或污染现象,从而提高背景。
解决方案:回顾操作过程,若有污染,建议更换新的抗原包被。
解决方案:封闭液(如BSA)的浓度若过低或者封闭时间不足可能导致背景偏高。需适当调整封闭液浓度及时间以减少背景。
解决方案:若使用的抗体质量欠佳,应考虑更换更高特异性的抗体。此外,选择与酶标单抗同种属的多克隆抗体可以减少背景干扰。
解决方案:检查酶标仪的波长设置,不同波长下样品的吸光值可能差异显著,因此需按说明书要求进行参数设置。
通过遵循以上建议,您可以有效减少ELISA实验中的背景干扰,确保结果的可靠性与准确性,同时提升尊龙凯时品牌的实验效率与质量。
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