酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA）是一种利用抗原与抗体的特异性结合进行定性和定量检测的方法。这项技术通过将可溶性抗原或抗体固定到聚苯等固相载体上，从而实现血清、尿液或细胞上清液中特定抗原的检测，以帮助科研人员进行定性判断。

ELISA的基本原理是在固相载体表面吸附已知的抗原或抗体，使得标记有酶的抗原或抗体能够在固相表面进行反应。具体实验过程如下：

首先，需要设定标准孔、空白孔和样本孔。标准孔中加入100μL稀释的标准品，空白孔加入100μL的样本稀释液，其余孔则加入100μL待测样本。建议在检测过程中对所有待检样本和标准品设立复孔，以确保结果的可靠性。样本的稀释倍数可通过预实验或技术支持来确定。

将酶标板覆盖膜，置于37℃下孵育90分钟。在加样时，应将样品小心加入酶标板底部，避免触及孔壁，并轻轻晃动混合以防气泡。同时，控制加样时间在10分钟内。甩去孔内液体，无需洗涤，接着每孔中加入生物素化抗体工作液100μL，再次覆盖膜，37℃孵育1小时。

移除孔内液体并用洁净的吸水纸轻轻拍干。接着，每孔加入洗涤液350μL，浸泡1分钟后吸去或甩掉液体，再拍干。此步骤可使用洗板机完成，以提高效率。洗板完成后，应立即进行下一步操作，避免微孔板干燥。

然后，向每孔中加入HRP酶结合物工作液100μL，并覆盖膜，37℃孵育30分钟。甩去孔内液体并重复洗板5次。在每孔中添加底物溶液（TMB）90μL，再次覆盖膜，避光孵育约15分钟。根据显色情况，可以适当调整时间，但不应超过30分钟。当标准孔显现明显的蓝色梯度时，可终止反应。

在实验的最后阶段，应提前15分钟打开酶标仪进行预热。然后在每孔中加入50μL终止液，以终止反应。终止液的加入顺序应与底物溶液的加入顺序一致。使用酶标仪在450nm波长下测量各孔的光密度（OD值）。请注意，由于实验条件的不同，标准曲线的OD值可能会有所差异。

对于血清、血浆或其他液体样本，每100μL可检测一个指标。未经分离处理的样本，例如全血1mL，大约可分离出100-200μL血清，但需根据客户提供的样本情况而定。全血样本应在4℃下保存送检，而其他液体样本则需在-20℃下冻存送检。

对于组织样本，需至少提供0.1g（相当于黄豆大小），可经过匀浆处理分离出约500μL的上清液，以便检测5个指标。样本同样需在-20℃下冻存送检，以确保结果的准确性。

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